Hvad skal du overveje, når du vælger det rigtige mikroskop til levende celle billeddannelsessystem

For at udføre live-celle billeddannelseseksperimenter med succes er det afgørende at bruge den rigtige tilgang. Når du vælger et passende mikroskop til din levende-celle-billeddannelse, skal følgende aspekter tages i betragtning: Prøvens levedygtighed, billedoptagelseshastighed (tidsbestemt opløsning) og påkrævet opløsning i alle tre dimensioner.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 etiket), og den laveste lysdosis for excitation er afgørende.

For eksperimenter med levende celler er højhastighedsopsamling ofte kritisk, især for studiet af hurtige dynamiske processer såsom vesikelobservation. Brug af optiske filtre resulterer i hastighedsbegrænsninger på grund af nødvendigheden af ​​sekventiel billeddannelse ved ændring af filtersæt for hver farve, der bruges til at studere interaktionen mellem flere komponenter. Indsamling af billeder sekventielt kræver mere tid end samtidig billedindsamling, og som et resultat kan hurtige prøvebevægelser gå glip af under optagelsen, da hver farve har et længere tidsinterval fra det ene billede til det næste. Når den direkte sammenligning mellem to eller flere farver er afgørende, kan signalerne have bevæget sig selv mellem den individuelle optagelse af fluoroforerne, hvilket komplicerer fortolkningen af ​​dataene.

Flere teknologier er tilgængelige til at erhverve billeder i 3 dimensioner over tid. Valget af system afhænger af dit eksperiment, og om højere hastighed eller mindre prøvebelysning under billeddannelse er din prioritet, når du opnår den ønskede 3D-opløsning. At vælge det mest passende system har traditionelt krævet, at du vælger mellem et kamerabaseret eller et konfokalt live cell imaging system, men moderne løsninger kan give begge modaliteter på en integreret måde.